罗氏快速高产新品：MagNA Pure 96 DNA和病毒核酸试剂盒

前言

MagNA Pure96是最近进入市场的一种全新试剂盒：它是一种全自动、超高速的系统，它能用于将高质量核酸从各种样品类型中高速分离，1小时以内即可完成多至96个样本的自动纯化，处理的样品容量最高达到1ml。该系统采用装有预装式即用型试剂的优化试剂盒，并配有相应的自动分离方法。这种试剂盒的配置基于沿用已久的磁珠技术，后者成功用于不同的MagNAPure系统已有多年。MagNA Pure96试剂盒由配有不同预装式密封缓冲液容器的试剂盘和含磁粉的专用瓶组成。可提供的所有试剂盒都有小容量（SV）和大容量（LV）的不同规格，可根据要处理的样品量决定。本文描述了2种MagNA Pure 96 DNA和病毒核酸试剂盒及其方法的特征和性能。

材料和方法

新的试剂盒及方法是用人EDTA血浆、枸橼酸盐血浆、血清和全血以及培养细胞（K562和HeLa）作为样品材料开发和测试的。

全血不需要经过预处理即可用于基因组DNA分离。培养细胞小球在使用前要悬浮于PBS中。

在病毒核酸分离时，使用前在样品中添加不同量的DNA病毒（巨细胞病毒、EB病毒、细小病毒B19）和RNA病毒（甲型肝炎病毒、甲型H1N1流感病毒）。然后用移液管将样品移入MagNAPure 96仪器上的MagNA Pure 96处理盒中。所有样品至少以8倍复制进行试验。根据实验需要，纯化核酸的洗脱体积被设定为50μl、100μl或200μl。在LightCycler®480仪器上采用吸光度（OD）测定、琼脂糖凝胶电泳和/或参数特定的定量实时PCR和RT-PCR分析对洗脱液进行分析。采用15μl各自混合母液和5μl各自洗脱液建立扩增反应，运行45个循环。

结果和讨论

一般特征
试剂盒的组成：排列在试剂盘中的预装式试剂容器，便于加载；分开放置、含磁珠（MGP）悬液的瓶子（图1）。

试剂盘和瓶子都在运行前放入仪器抽屉中各自的位置。使用后容器可以方便地重新密封，并保存以待必要时进行后续的运行。MGP瓶具有特殊的瓶盖，可以在仪器的针穿过后自动重新密封。所有组件在室温下都能保持稳定。

MagNA Pure 96DNA和病毒核酸小容量规格用于从200μl全血，或从5×105个培养细胞中分离基因组DNA。它还可以从200μl血浆、血清或全血中分离病毒DNA或RNA。试剂盒包括3个预装式试剂容器，每个容器最多可进行192次反应（即每个试剂盒进行576次纯化）。

MagNA Pure 96 DNA和病毒核酸试剂盒大容量规格用于从500μl或1000μl全血或从106个培养细胞中分离基因组DNA。它能从500μl血浆、血清或全血，或从1000μl血浆或血清中分离病毒DNA或RNA。试剂盒包括3个预装式试剂容器，每个容器最多可进行96次反应（500μl）或48次反应（1000μl）（即每个试剂盒分别进行288或144次纯化）。

如果需要的话，试剂盒可用于不同的优化方法，包括外部溶解方法可供选用，从而允许在MagNA Pure 96仪器外进行病毒灭活。对于所有方法，核酸从不同容量的样品中都可以方便地洗脱，样品的不同容量可以由用户选择。

基因组DNA
基因组DNA的分离及其后续分析显示可重复性、产量、完整度和纯度都很高。根据琼脂糖凝胶分析，DNA片段平均显著大于20 kb（图2）。

表1总结了典型的DNA产率和纯度。请注意产率显著依赖于血细胞数，因此变化可能达到2倍。

           

如LightCycler® 480仪器中进行的PCR之前的稀释实验所示（数据未显示），DNA也被证明不含PCR抑制剂。

用不同量的血液与样品检测了该程序的可量测性。结果见图3。