一、常规溶液

(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)

甲液：1/15mol/L Na₂HPO₄溶液

Na₂HPO₄                  9.465g

蒸馏水                   加至1000ml

乙液：l/15mol/L KH₂PO₄溶液

KH₂P0₄                    9.07g

蒸馏水                   加至1000m1

分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:

 

    (二)0.3％台盼兰染液

    称取台盼兰(Trypanblue)粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。

    (三)0.5％酚红指示剂

   酚红                     0.5g

0.1N(0.4％)NaOH          15ml

   双蒸水                   85ml

   将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。

    (四)5.6％NaHCO₃溶液

   称NaHCO₃5.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4℃冰箱保存)

    (五)10μg／ml秋水仙素

   秋水仙素                   lOmg

生理盐水                   100ml

装入茶色瓶中，为贮备液，4℃冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。

    (六)0.4％KCl-0.4％柠檬酸钠低渗液

    将0.4％KCl和0.4％柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。

    (七)2％柠檬酸钠

    称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。

   （八）0.2％次甲基兰染液

    称次甲基兰(Methyleneblue)0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。

    (九)0.5％醋酸洋红(Aceio Carmine)染液

   洋红                   lg

   醋酸                   90ml

   蒸馏水                 110ml

   将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。

    (十)1％甲苯胺兰(Toluidine blue)

    称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。

    (十一)1/3000中性红染液

    取中性红(Neutral red)0.1克，加蒸馏水300ml。室温保存。

    (十二)Giemsa染液

    1．贮备液

Giemsa粉                   1g

       纯甘油                      66ml

       甲醇                        66ml

   先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放入56℃温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。

    2．工作液

    临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。

    (十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液

   苏木精                   1.0g

   乙醇                     50ml

   醋酸                     5ml

   甘油                     50ml

   硫酸铝钾                   5g

   蒸馏水                     50ml

   将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。

    二、细胞化学和细胞组分分离溶液

    (一)M一缓冲液

   眯唑(Imidazole)                   3.404g

    KCI                               3.7g

   MgCl₂·6H₂O                        101.65mg

   ECTA                              380.35mg

   EDTA                              29.224mg

   巯基乙醇                          0.07ml

   甘油                              297ml

   蒸馏水                            加至1000ml

    用lNHCl调pH至7.2室温保存。

    (二)2％Triton X一100溶液

    量取2mlTritonX一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M缓冲液98ml即可。

   （三）0.2％考马斯亮兰R-250染液

   甲醇                              46.5ml

   醋酸                              7.0ml

   考马斯亮兰                        0.2g

蒸馏水                            加至100ml

(四)A．0.1％碱性固绿染液(pH8.0～8.5)

    1．0.1％固绿水溶液

    固绿(Fastgreen)                   0.1g

   蒸馏水                             100ml

    2．0.05％Na₂C0₃溶液

   Na₂C0₃                              50mg

蒸馏水                             100ml

用时按1:1体积混合即可。

    B．0.1％酸性固绿染液(pH2.2)

    1．0.1％固绿水溶液。

    2．mol／L×75盐酸液

    盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml

    用时按l:1混合。

    (五)甲基绿一哌咯宁染液

    1.1mol／L醋酸缓冲液(pH4.8)：

       (1)醋酸                        17ml

       蒸馏水                         加至200ml

       (2)醋酸水                      13.5g

   蒸馏水                             加至lOOml

用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。

    2．甲基绿一哌咯宁(methyl green—Pyrcnln)

       5％哌咯宁水溶液                6ml

       2％甲基绿水溶液                6ml

       蒸馏水                         16ml

       lmol/L醋酸缓冲液              16ml

    lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。

    (六)Schiff试剂

   将碱性品红0.5克加入lOOml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50℃时过滤到棕色瓶中，加1NHC11O毫升，冷却至25℃时加入1克NaHSO₃，此时需很好的振荡，避光过夜。次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得Schiff试剂。避光低温保存。

    (七)联苯胺混合液

    联苯胺(4.4 Diaminobenzidine)       0.2g

   95％乙醇                           lOOml

   3％过氧化氢                        2滴

    此液临用时配制。

    (八)l％番红水溶液

   番红(Safranin)                     1.0g

   蒸馏水                             100ml

    (九)1％SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecylsulfate,SDS)

   SDS                                10g

   45％乙醇                           100ml

    (十)1mol／LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxymethylaminomethane Tris/HCL)pH7.8

   Tris                                12.114g

   蒸馏水                              lOOml

    先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100ml

  (十一)Ringer Solution

氯化钠(冷血动物用0．65克)          0.9克

氯化钾                              0.042克

氯化钙                              0.025克

蒸馏水                              100ml

(十二)淀粉肉汤培养基

蛋白                                2g

淀粉                                6g

牛肉汤                              100ml

用10％NaHCO₃调pH至7.0～7.2

(十三)0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液

蔗糖                                85.5g

氯化钙                              0.33g

蒸馏水                              1000ml

(十四)1％詹纳斯绿B染液

取詹纳斯绿(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml

(十五)1％刚果红染液

刚果红                             1g

蒸馏水                             100ml

(十六)Gomori硝酸铅作用液

0.05mol／L醋酸缓冲液(pH5)         lOOml

0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其        42ml

醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共200ml

B-甘油磷酸钠                       2g

醋酸铅                             2g

5％氯化镁                          5ml

以上作用液在临用时配制，最终在pH5～5.2，过滤使用。

(王世藩  汇编)

三、细胞培养和细胞融合溶液

(一)0.01mol／LPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline，PBS)pH7.2。

0.2mol／L磷酸氢二钠液(甲液)： 

NaH₂PO₄·12H₂O                      35.814g

双蒸水                             加至500ml

0.2mol／L磷酸二氢钠液(乙液):

   NaH₂PO₄·12H₂O                      15.601g

   双蒸水                             加至500ml

   取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。

    (二)50％PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycolmwl500)

   称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37℃予热的MEM培养液，混匀，保温在37℃水浴中待用。

    (三)MEM培养液(含10％小牛血清)

   MEM培养液(日本制药株式会社)       9.4g

   双蒸水                            1000ml

   NaHCO₃                             1.5g

    谷氨酰胺(L-glutamin)              0.292g

    56℃灭活30分钟的小牛血清110ml

   MEM粉末加水溶解后，用NaHCO₃调pH到7.1(因在抽滤过程中pH升高0.2～0.3)，然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G₆抽滤除菌，分装，置4℃冰箱保存备用。

    (四)0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液

   胰蛋白酶(Trypsin)粉                0.25g

   EDTA粉                            20.0mg

    0.01mol／LPBS                     100ml

   先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解，液体呈透明为止)，用G₅抽滤，分装置4℃冰箱中保存。

    (五)Hanks液

    1．原液甲

   NaCl                                160g

   KCl                                 8g

   MgSO₄·7H₂O                          2g

   MgCI₂·6H₂O                          2g

    溶于800ml馏水中。

   CaCl₂(无水)                          2.8g

    溶于100ml蒸馏水中。

   将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。

    原液乙

   Na₂HPO₄·12H₂O                        3.04g

   KH₂PO₄                                1.2g

   葡萄糖                               20.0g

   溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5％酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。

    2．使用液

   甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱中保存。使用时用5.6％NaHCO₃调pH值到所需要求。

    (六)1640培养液(含lO％小牛血清)

   RPMI-1640粉                          10.39g

   双蒸水                                加至1000ml

   通入适量的C0₂气体，边通入CO₂边慢慢搅拌，使其(呈透明)完全溶解。用NaHCO₃1.5克调pH值到7.2。

    双抗1万u/ml                         10ml

   灭活小牛血清                          110ml

   混匀上述液体，立即用G₆抽滤除菌分装，置4℃冰箱备用。

    (七)青、链霉素溶液

   青霉素钠盐(40万u／瓶)                5瓶

链霉素(100万u／瓶)                   2瓶

将两者溶于200ml0.9％的无菌生理盐水，分装小瓶，-30℃保存。双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。

    (八)二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。4％。

    (九)BrdU溶液(200ug/m1)

   用无菌青霉素瓶，在室温下称取1.0mg，在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml，溶解，混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。最好用时现配。

    (十)2×SSC溶液

用分析天平称取氯化钠17.53克，柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中，加蒸馏水至1000毫升。

  （十一）3％琼脂：

取琼脂粉3克，加入双蒸水到100毫升，搅匀，高压消毒后(15磅20分钟)，冷藏备用，使用前重新加热煮沸(贮存时间不宜过长)。

四、制备电镜标本的溶液

(一)2.5％戊二醛溶液

25％戊二醛                   lOml

    0.1mol／L二甲砷酸钠缓冲液

    装入茶色瓶中，保存于4℃冰箱备用。

    (二)0.1mol／L二甲砷酸钠缓冲液

   二甲砷酸钠                   10.70g

   蒸馏水                        500ml

   将二甲砷酸钠置于500ml容量瓶中，先加水约400ml，震荡使其溶解，用HCl调pH到7.4，加入剩余蒸馏水，4℃冰箱保存。

    (三)包埋剂

环氧树脂Epon812               56.30g  

DDSA(十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinic

   anhydride，DDSA)               14.60g

    MNA(甲基内次甲基邻苯二甲酸酐Methyl Nadic)

   anhydride，MNA                 29.00g

   混合上述三种包埋剂成分，搅拌30分钟使其充分混匀。再加加速剂2,4,6一三(二甲氨基甲基)苯酚(2，4，6-tridimethylaminomethylphenol，DMP-30)1.5ml，继续搅拌30分钟，置于干燥罐中(室温)备用。

    (四)2％单宁酸

   单宁酸                          2g

   双蒸水                          100ml

溶解后过滤装茶色瓶中，4℃冰箱保存。

(五)高锰酸钾固定剂

柠檬酸三钠                      60mmol/L

氯化钾                          25mmol/L

氯化镁                          35mmol/L

   高锰酸钾                        125mmol/L

pH为7.4-7.8，装茶色瓶中，4℃冰箱中保存，有效期2个月左右。

(六)1％OsO₄溶液

 OsO₄                            0.5g

 0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液。     50ml

    OsO₄一般为0.5或1克安瓶中封闭包装，配制时剥去商标，用自来水洗净，放洗涤液中泡4～12小时后用水冲洗，在安瓶上划痕，用蒸馏水洗净，投入茶色瓶中，加缓冲液，用玻璃棒在瓶中捣碎，轻轻摇动放冰箱中，48小时后完全溶解。此药蒸气对人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用，用时特别小心，在通风橱内操作。

五、显影、定影溶液

(一)D-72显影液                 

温水(52℃)                       750ml

米吐尔                           3g

无水亚硫酸钠                     45g

对苯二酚                         12g

无水碳酸钠                       67.5g

溴化钾                           19g

   水                               加至1000ml

    D-72显影液为通用显影液，既能显影胶片又能用于相纸显影。

    使用原液，20℃显影时间1～2分钟可得高反差。

   加水1:2稀释后使用可得较低反差。1:1稀释使用。20℃时显影时间3～4分钟可得正常反差。

    (二)SB-1停显液配方

    水                               1000ml

28％醋酸                         48ml

    停显时间lO秒左右。

(三)F-5酸性坚膜定影液

水                               750ml

硫代硫酸钠                       240g

无水亚硫酸钠                     15g

28％醋酸                         48ml

硼酸                             7.5g

钾矾                             15g

水                               1000ml

定影时，药液温度应保持在18~20℃定影时间10~15分钟。

    配药原则

   配制时先取容量3/4的清水，水温50℃左右，按配方的顺序，把称好的药逐一加入，只有前一药品溶解后，方可放入第二种药品，并继续溶解下去，最后将清水加至全量。

    配完后要经12小时，待各种药品充分作用后才能使用。

   上述各种溶液配制好后，匀应贴瓶签，注明名称，浓度及配制日期，并按规定方法保存，用前检查有无变质或污染现象后，方可使用。